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納米材料專題
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納米材料在生物傳感器中的應(yīng)用
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導(dǎo)讀:納米材料的特點(diǎn)與傳感器所要求的多功能、微型化、高速化相對應(yīng)。另外,作為傳感器材料,還要求功能廣、靈敏度高、響應(yīng)速度快、檢測范圍寬、選擇性好等優(yōu)點(diǎn),納米材料能較好地符合上述要求。納米材料引入生物傳感器領(lǐng)域后,提高了生物傳感器的檢測性能,并促發(fā)了新型的生物傳感器。納米材料的獨(dú)特的化學(xué)和物理性質(zhì)使得其對生物分子或者細(xì)胞的檢測靈敏度大幅提高,檢測的反應(yīng)時間也得以縮短,并且可以實(shí)現(xiàn)高通量的實(shí)時檢測分析。其中納米金和磁性納米顆粒在生物傳感器中的應(yīng)用尤其受到關(guān)注。


生物傳感器是目前生命科學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)測試方法研究中最為活躍的領(lǐng)域之一,而納米材料則被認(rèn)為是跨世紀(jì)材料研究領(lǐng)域的熱點(diǎn),有“21世紀(jì)最有前途的材料”的美譽(yù),受到國內(nèi)外普遍重視,進(jìn)入21世紀(jì)后,納米材料和納米科技的迅猛發(fā)展為新型生物傳感器的研制提供了難得的機(jī)遇。納米生物傳感器是納米材料、納米科技與生物傳感器的融合,其研究涉及到生物技術(shù)、信息技術(shù)、納米科學(xué)、界面科學(xué)等多個重要領(lǐng)域,因而成為國際上的研究前沿和熱點(diǎn)。

一、生物傳感器

生物傳感器是一類特殊形式的傳感器,是一種對生物物質(zhì)敏感并將其轉(zhuǎn)換為聲、光、電等信號進(jìn)行檢測的儀器。生物傳感器具有接受器與轉(zhuǎn)換器的功能,由識別元件 (固定化的生物敏感材料,包括酶、抗體、抗原、微生物、細(xì)胞、組織、核酸等生物活性物質(zhì))、理化換能器 (如氧電極、光敏管、場效應(yīng)管、壓電晶體等) 和信號放大裝置構(gòu)成。生物傳感器技術(shù)是一個非?;钴S的工程技術(shù)研究領(lǐng)域,它與生物信息學(xué)、生物芯片、生物控制論、仿生學(xué)、生物計(jì)算機(jī)等學(xué)科一起處在生命科學(xué)和信息科學(xué)的交叉區(qū)域,是發(fā)展生物技術(shù)必不可少的一種先進(jìn)的檢測與監(jiān)控裝置。與傳統(tǒng)的分析方法相比, 具有以下特點(diǎn):

1)體積小、響應(yīng)快、準(zhǔn)確度高,可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)在線檢測;

2)一般不需進(jìn)行樣品的預(yù)處理,可將樣品中被測組分的分離和檢測統(tǒng)一為一體,使整個測定過程簡便、迅速,容易實(shí)現(xiàn)自動分析;

3)可進(jìn)行活體分析;
4)成本遠(yuǎn)低于大型分析儀器,便于推廣普及。

生物傳感器有許多種分類方式:

1)根據(jù)生物活性物質(zhì)的類別,生物傳感器可以分為酶傳感器、免疫傳感器、DNA傳感器、細(xì)胞傳感器、組織傳感器和微生物傳感器等;

2)根據(jù)檢測原理,生物傳感器可分光學(xué)生物傳感器、電化學(xué)生物傳感器和壓電生物傳感器等;

3)按照生物敏感物質(zhì)相互作用的類型分類,可分為親和型和代謝型2種;

4)可根據(jù)所監(jiān)測的物理量、化學(xué)量或生物量而命名為熱傳感器、光傳感器和胰島素傳感器等。

生物傳感器的應(yīng)用,涉及到醫(yī)療保健、疾病診斷、食品檢測、環(huán)境監(jiān)測、發(fā)酵工業(yè)等領(lǐng)域。

二、納米材料

納米材料具有小尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)、量子尺寸效應(yīng)及宏觀量子隧道效應(yīng)等,使得其表現(xiàn)出奇異的化學(xué)物理性質(zhì)。納米粒子作為一種常用的納米材料,具有制備方法簡單、尺寸可控、表面易于修飾、表征簡便等優(yōu)點(diǎn),在分析化學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。

納米材料的特點(diǎn)與傳感器所要求的多功能、微型化、高速化相對應(yīng)。另外,作為傳感器材料,還要求功能廣、靈敏度高、響應(yīng)速度快、檢測范圍寬、選擇性好等優(yōu)點(diǎn),納米材料能較好地符合上述要求。納米材料引入生物傳感器領(lǐng)域后,提高了生物傳感器的檢測性能,并促發(fā)了新型的生物傳感器。納米材料的獨(dú)特的化學(xué)和物理性質(zhì)使得其對生物分子或者細(xì)胞的檢測靈敏度大幅提高,檢測的反應(yīng)時間也得以縮短,并且可以實(shí)現(xiàn)高通量的實(shí)時檢測分析。其中納米金和磁性納米顆粒在生物傳感器中的應(yīng)用尤其受到關(guān)注。


1、金屬納米材料

金屬納米材料良好的電子傳遞性能使其成為電化學(xué)生物傳感器中最為常用的納米材料之一,其中尤以納米金的應(yīng)用最為廣泛。納米金制備簡單、性狀穩(wěn)定、生物相容性良好,而且易于進(jìn)行表面化學(xué)修飾,因此,利用納米金與生物分子進(jìn)行組裝并介導(dǎo)電子傳遞,是構(gòu)建電化學(xué)生物傳感器的良好方案。

納米金在生物傳感器中的應(yīng)用,主要集中在利用納米粒子做探針載體、信號分子等方面。


1.1探針載體

納米金能迅速、穩(wěn)定地吸附核酸、蛋白質(zhì)等生物分子,而這些生物分子的生物活性幾乎不會發(fā)生改變,所以納米金具有優(yōu)良的生物相容性,可以作為生物分子的載體。


1.2信號分子

納米金能廣泛地應(yīng)用于DNA、抗體和抗原等生物物質(zhì)的標(biāo)記,使得納米金與生物活性分子結(jié)合后形成的探針可用于生物體系的檢測中,納米金在可見區(qū)有特征等離子體共振吸收,其吸收峰的等離子共振常隨著尺寸的變化而發(fā)生頻移,其溶液的顏色從橘紅色到紫紅色發(fā)生相應(yīng)變化,有利于肉眼觀察。

用納米金不僅可以作為光學(xué)標(biāo)記,同時還可以作為很好的電學(xué)標(biāo)記。金本身是非常優(yōu)良的導(dǎo)電材料,具有優(yōu)異的電化學(xué)性質(zhì),可作為電化學(xué)傳感器的指示劑。用納米金作為信號分子能顯著提高電化學(xué)傳感器的檢測靈敏度,而且這種方法儀器簡單、無污染、檢測穩(wěn)定可靠、靈敏度高。

納米金顆粒有著優(yōu)異的化學(xué)和物理性能,有著極高的比表面積,有利于提高生物分子的吸附能力,并能提高生化反應(yīng)的速度,因此被廣泛用于生物分析。納米金的優(yōu)異性能使得其在生物醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)等生物標(biāo)記分析領(lǐng)域中具有廣泛而重要的應(yīng)用。


2、碳納米管

自從1991年首次被報道以來,碳納米管(carbonnanotubes,CNTs)可以說是被研究得最多的納米材料。與納米金一樣,CNTs同樣也具備極好的電子傳遞能力、蛋白質(zhì)的高負(fù)載能力以及良好的生物相容性,而且,由于 CNTs 本身的物質(zhì)基礎(chǔ)就是碳,因此其功能化將更為方便和多樣。此外,由于CNTs為一維納米材料,意味著CNTs在電極表面的組裝將呈現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)狀。


碳納米管有著優(yōu)異的表面化學(xué)性能和良好的電學(xué)性能,是制作生物傳感器的理想材料。無論是單壁碳納米管還是多壁碳納米管在生物傳感器中都有應(yīng)用,如利用碳納米管改善生物分子的氧化還原可逆性、利用碳納米管降低氧化還原反應(yīng)的過電位、利用碳納米管固定化酶、利用碳納米管進(jìn)行直接電子傳遞、用于藥物傳遞和細(xì)胞病理學(xué)的研究等。碳納米管還適用于做原子力顯微鏡的探針尖,在碳納米管頂端修飾上酸性基團(tuán)或堿性基團(tuán),就可以作為原子力顯微鏡針尖來滴定酸性或堿性基團(tuán)。納米管羧基化后可以進(jìn)一步衍生化,實(shí)現(xiàn)與酶、抗原/抗體和脫氧核糖核酸(DNA)等分子的結(jié)合,制備出各種生物傳感器。

需要提出的是,由于CNTs難以具備納米金那樣良好的形態(tài)分布,因此對有序的表面組裝提出了挑戰(zhàn)。另外,大多數(shù)蛋白質(zhì)的尺寸都屬于零維的納米級,因此在一維的CNTs表面組裝相對而言缺少靈活性。出于這些考慮,將CNTs與零維的納米顆粒,如納米金、納米鉑等聯(lián)合運(yùn)用,在一定程度上可以克服兩者在某些方面的缺陷,因而也是傳感器構(gòu)建中的良好策略。


3、納米氧化物

除了具備納米材料共有的一些性質(zhì)外,納米氧化物還依材料的不同具備一些特殊的效應(yīng),比如納米Fe3O4的磁效應(yīng)。納米TiO2的光電效應(yīng)等,而這些效應(yīng)在新型生物傳感器的構(gòu)建中可以產(chǎn)生一些意想不到的效果。納米 TiO2 是另一種具有特殊效應(yīng)、光電效應(yīng)的納米材料,由于具有極強(qiáng)的紫外線屏蔽能力和很高的表面活性,納米TiO2已經(jīng)被大量用于污水處理消毒殺菌,以及在化妝品和涂料中防紫外線侵蝕。

納米 TiO2 是一種在光化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域中非常有發(fā)展前途的納米材料,其優(yōu)良的生物相容性易于吸附生物分子的特性及良好的化學(xué)反應(yīng)活性已在生物傳感領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

磁性納米顆粒是近年來發(fā)展起來的一種新型材料 ,因磁性納米粒子具有特殊的超順磁性 ,因而在聚磁電阻、磁記錄、軟磁、永磁和巨磁阻抗材料等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。磁性納米材料還可結(jié)合各種功能分子,如酶、抗體、細(xì)胞、DNA或RNA等,使其在核酸分析、臨床診斷、靶向藥物、細(xì)胞分離和酶的固定化等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用研究。在生物傳感器領(lǐng)域 ,磁性納米顆粒的應(yīng)用為生物傳感器開辟了廣闊的前景,磁性納米顆粒能顯著提高生物傳感器檢測的靈敏度,實(shí)現(xiàn)生物分子的分離,提高了檢測的通量。

磁性納米顆粒在生物傳感器中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在生物活性物質(zhì)的固定、分離和檢測。


3.1生物活性物質(zhì)的固定

磁性納米顆粒的表面可很容易地包埋生物高分子,如多聚糖,蛋白質(zhì)等形成核殼式結(jié)構(gòu)。因此磁性納米顆??蓱?yīng)用于酶、抗體、寡核苷酸和其他生物活性物質(zhì)的固定。


3.2生物物質(zhì)的分離

在磁性分離中,針對所要進(jìn)行分離的生物物質(zhì)如蛋白質(zhì)、DNA序列、細(xì)胞、底物、抗原的特征,在超順磁性的納米粒子(如 5~100 nm的 Fe3O4 )的表面上修飾上各種氨基、羥基、羧基、巰基等功能基團(tuán)。經(jīng)修飾后的磁性納米粒子加入混合物后,能快速將靶向目標(biāo)物結(jié)合到磁性顆粒表面,在外加磁場作用下,能被磁場吸引,與其他的物質(zhì)分離。當(dāng)撤去磁場后,磁性顆粒又可很快地均勻分散在溶液中。


3.3生物活性物質(zhì)的檢測

磁性納米在實(shí)現(xiàn)生物分子的快速、實(shí)時和高通量檢測方面有著廣泛的應(yīng)用前景。


4、量子點(diǎn)

量子點(diǎn)作為熒光標(biāo)記物,已經(jīng)被廣泛用于熒光示蹤,以金屬硫/硒/碲化物 Zn/Cd/Pb-S/Se/Te等為代表的量子點(diǎn),一方面是很好的生物標(biāo)記材料,另一方面,其中的金屬離子 Zn2+、Cd2+、Pb2+可用于陽極溶出伏安法檢測,從而提供電化學(xué)信號。

近來,量子點(diǎn)用于生物傳感器的研究備受關(guān)注。量子點(diǎn)是顯示量子尺寸效應(yīng)的半導(dǎo)體納米微晶體,其尺寸小于相應(yīng)體相半導(dǎo)體的波爾直徑,通常在2~20nm。量子點(diǎn)可用于細(xì)胞內(nèi)的檢測,相比于傳統(tǒng)的熒光分子,量子點(diǎn)有3個主要的優(yōu)點(diǎn):量子點(diǎn)的發(fā)光波長可以簡單地通過調(diào)節(jié)其直徑大小而改變,這對應(yīng)用非常重要;另外,量子點(diǎn)的發(fā)光波長比較窄,效率較高;更為重要的是,量子點(diǎn)沒有光漂白效應(yīng)。這3個優(yōu)點(diǎn)使量子點(diǎn)在生物分子探針和生物傳感器領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用潛力。目前關(guān)鍵的問題在于如何對量子點(diǎn)表面進(jìn)行有效的生化修飾,印度中央食品技術(shù)研究所研究人員利用碲化鎘(CdTe)量子點(diǎn)制備出的生物熒光探針,可用于食品、環(huán)境等目標(biāo)分析物的高靈敏檢測。

5、復(fù)合納米材料

不同的納米材料各自具備一定的特性,在電化學(xué)生物傳感器的設(shè)計(jì)中使用單一的材料 難以充分發(fā)揮納米材料的性能,因此,同時使用多種納米材料成為一個解決方案。一種思 路是首先合成兩種或多種納米材料,然后在傳感器的構(gòu)建中同時或在不同階段分別運(yùn)用;另一種思路則是在納米材料的合成階段將不同的材料進(jìn)行組裝,即合成復(fù)合納米材料,將不同納米材料的特性整合到一個納米復(fù)合體中。一個很好的例子是CNTs與金屬納米顆粒復(fù)合的材料,另一個例子則是合成核/殼結(jié)構(gòu)的納米顆粒,而且這種做法目前更為常見。

6、納米光纖

隨著納米光纖探針和納米敏感材料技術(shù)逐步成熟,運(yùn)用納米光纖探針和納米級識別元件檢測微環(huán)境中的生物、化學(xué)物質(zhì)已成為可能,運(yùn)用這種高度局部化的分析方法,能夠監(jiān)測細(xì)胞、亞細(xì)胞等微環(huán)境中各成分濃度的漸變以及空間分布。光纖納米生物傳感器主要有光纖納米熒光生物傳感器、光纖納米免疫傳感器等,具有體積微小、靈敏度高、不受電磁場干擾、不需要參比器件等優(yōu)點(diǎn)。

6.1光纖納米熒光生物傳感器

一些蛋白質(zhì)類生物物質(zhì)自身能發(fā)熒光,另一些本身不能發(fā)熒光的生物物質(zhì)可以通過標(biāo)記或修飾使其發(fā)熒光,基于此,可構(gòu)成將感受的生物物質(zhì)的量轉(zhuǎn)換成輸出信號的熒光生物傳感器。熒光生物傳感器測量的熒光信號可以使熒光猝滅,也可以使熒光增強(qiáng)可測量熒光壽命,也可測量熒光能量轉(zhuǎn)移。光纖納米熒光生物傳感器具有熒光分析特異性強(qiáng)、敏感度高、無需用參比電極、使用簡便、體積微小等諸多優(yōu)點(diǎn),具有廣泛的應(yīng)用前景。

6.2光纖納米免疫傳感器
免疫傳感器是指用于檢測抗原抗體反應(yīng)的傳感器,根據(jù)標(biāo)記與否,可分為直接免疫傳感器和間接免疫傳感器;根據(jù)換能器種類的不同,又可分為電化學(xué)免疫傳感器、光學(xué)免疫傳感器、質(zhì)量測量式免疫傳感器、熱量測量式免疫傳感器等。光學(xué)免疫傳感器是將光學(xué)與光子學(xué)技術(shù)應(yīng)用于免疫法,利用抗原抗體特異性結(jié)合的性質(zhì),將感受到的抗原量或抗體量轉(zhuǎn)換成可用光學(xué)輸出信號的一類傳感器,這類傳感器將傳統(tǒng)免疫測試法與光學(xué)、生物傳感技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)集于一身,使其鑒定物質(zhì)具有很高的特異性、敏感性和穩(wěn)定性。而光纖納米免疫傳感器是在光學(xué)免疫傳感器基礎(chǔ)上將敏感部制成納米級,既保留了光學(xué)免疫傳感器的諸多優(yōu)點(diǎn),又使之能適用于單個細(xì)胞的測量。

三、結(jié)語
隨著納米技術(shù)和生物傳感器交叉融合的發(fā)展,涌現(xiàn)出越來越多的新型納米生物傳感器,如量子點(diǎn)、DNA、寡核苷配體等納米生物傳感器。這些生物傳感器的最顯著特點(diǎn)是快速、準(zhǔn)確、靈敏,集多功能、便攜式、一次性于一身,不僅可以檢測細(xì)菌、病毒、蛋白質(zhì)、酶、血糖、有毒有害小分子物質(zhì)、重金屬離子等,甚至該還探尋到原子、分子內(nèi)部(包括細(xì)胞內(nèi))進(jìn)行實(shí)時單分子水平分析。但未來的新一代納米生物傳感器也面臨著諸多挑戰(zhàn),如更高靈敏度、特異性、生物相容性、集成多種技術(shù)、檢測方法簡化、制備工藝、批量化生產(chǎn)、成本效益等。納米生物傳感器陣列或多種納米生物傳感器的集成,是生物傳感器的一個重要發(fā)展趨勢。分子自組裝加工工藝簡單可控,可以實(shí)現(xiàn)快速復(fù)制,而且成本較低,對生物傳感器的發(fā)展有很重要的促進(jìn)作用,有利于高靈敏度、低成本、一次性納米生物傳感器的發(fā)展。而生物分子自組裝技術(shù)更值得關(guān)注,具有天然的生物兼容性、優(yōu)異的結(jié)合性能,是生物傳感器發(fā)展的一個新領(lǐng)域。納米生物傳感器未來可廣泛滿足各種醫(yī)療診斷、藥物發(fā)現(xiàn)、病原體檢測、食品檢測、環(huán)境檢測、生物反恐和國家安全防御方面的需要,未來完全有可能替代當(dāng)前的一些分析方法,并很可能成為生命科學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)方法。

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